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篇1：人牙周膜干细胞的体外分离、纯化及初步鉴定
人牙周膜干细胞的体外分离、纯化及初步鉴定
目的:体外分离纯化人牙周膜干细胞,研究其生物学特性及表型特点并进行初步鉴定.方法:采用胶原酶和Dispase酶联合消化法培养人牙周膜干细胞,有限稀释法分离纯化,将克隆形成的`细胞通过透射电镜观察其超微结构、流式细胞仪细胞周期分析及免疫组织化学染色技术检测抗波形丝蛋白(Vimentin)、STRO-1、骨粘素(ON)、骨涎蛋白(BSP)的表达. 结果:获得纯化人牙周膜干细胞,在透射电镜下,这种细胞核质比例大,核大,细胞器少;流式细胞仪细胞周期分析大多数细胞处于G0/G1期,为慢周期性;该细胞抗波形丝蛋白、STRO-1表达阳性、骨粘连素、骨桥蛋白弱阳性表达. 结论:提供了比较有效的分离纯化牙周膜干细胞的方法.该方法分离的人牙周膜干细胞具有干细胞的超微结构、细胞周期及表型特点.
作 者：高秦 刘宏伟 金岩 聂鑫 刘源 作者单位：高秦(广州南方医科大学南方医院,510515)刘宏伟(上海同济大学口腔医学院)
金岩,聂鑫,刘源(西安第四军医大学口腔医院病理科、第四军医大学组织工程研发中心)
刊 名：实用口腔医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF PRACTICAL STOMATOLOGY 年，卷(期)： 22(1) 分类号：Q254 关键词：人牙周膜干细胞 细胞克隆 超微结构 细胞周期 免疫细胞化学篇2：大鼠骨髓间质干细胞的分离纯化与鉴定
大鼠骨髓间质干细胞的分离纯化与鉴定
采用密度梯度离心法分离骨髓间质干细胞,差速贴壁法进行纯化,应用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等对纯化细胞进行鉴定,结果细胞表面抗原CD29,CD44,CD105,CD166 表达呈阳性,而 CD14,CD34,CD45表达呈阴性.采用RT-PCR鉴定了三个基因:nestin,NST,Oct-4,前两者呈阳性表达,后者弱阳性表达.这些细胞特异抗原与基因表达综合起来,表明得到的细胞具备骨髓间质干细胞的特性.密度梯度分离与差速贴壁相结合,可获得较好均一性的`骨髓间质干细胞,是一种简单可靠、易于推广的骨髓干细胞获取方法,可为细胞与组织工程研究提供种子细胞.
作 者：张荣利 冯雪 张会亮 罗国安 李连达 王义明 Zhang Rongli Feng Xue Zhang Huiliang Luo Guoan Li Lianda Wang Yiming 作者单位：张荣利,冯雪,罗国安,王义明,Zhang Rongli,Feng Xue,Luo Guoan,Wang Yiming(清华大学生命科学与医学研究院,北京,100084)张会亮,Zhang Huiliang(清华大学生命科学与医学研究院,北京,100084;山东师范大学生命科学学院,济南,250014)
李连达,Li Lianda(中国中医科学院西苑医院,北京,100091)
刊 名：中国工程科学 ISTIC英文刊名：ENGINEERING SCIENCE 年，卷(期)： 9(7) 分类号：Q789 Q813 关键词：大鼠 骨髓间质干细胞 流式细胞分析篇3：人骨髓间充质干细胞体外培养及鉴定
人骨髓间充质干细胞体外培养及鉴定
目的:体外分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞(hBMSC).方法:利用密度梯度离心法分离出人骨髓单个核细胞(MNC),通过贴壁筛选法建立hBMSC的体外培养体系,并通过一系列检测方法对所培养的'细胞进行鉴定.结果:细胞主要呈“成纤维样”,但体积较大、形状不规则、细胞质突起多,细胞核大而疏松,核仁明显.流式细胞仪检测:CD34阳性率为2.09%、CD29阳性率为94.46%;CD54及CD105表达阳性.细胞周期及透射电镜检测提示细胞处于相对原始状态.免疫细胞化学染色显示:CD14、CD45、胶原蛋白Ⅱ呈阴性;CD106、CD166、纤维连接蛋白、波形蛋白及胶原纤维酸性蛋白呈阳性.细胞化学染色:糖原染色呈强阳性;碱性磷酸酶染色呈阴性.通过诱导分化培养可诱导出成骨细胞.结论:成功建立了稳定的hBMSC体外培养体系,按照此培养体系进行培养可获得hBMSC.hBMSC可传代培养,但在培养过程中细胞逐渐出现老化现象,且不能冻存.
作 者：梁雪 粟永萍 孔佩艳 陈幸华 彭贤贵 徐辉 曾东风 艾国平LIANG Xue SU Yong-ping KONG Pei-yan CHEN Xing-hua PENG Xian-gui XU Hui ZENG Dong-feng AI Guo-ping 作者单位：梁雪,孔佩艳,陈幸华,彭贤贵,曾东风,LIANG Xue,KONG Pei-yan,CHEN Xing-hua,PENG Xian-gui,ZENG Dong-feng(第三军医大学附属新桥医院血液科,重庆,400037)粟永萍,徐辉,艾国平,SU Yong-ping,XU Hui,AI Guo-ping(预防医学院解放军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038)
刊 名：医学研究生学报 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATES 年，卷(期)：2007 20(5) 分类号：Q813.11 关键词：人骨髓间充质干细胞 造血微环境 细胞培养篇4：重组hepcidin的分离纯化及鉴定
重组hepcidin的分离纯化及鉴定
建立了重组hepcidin的分离纯化方法,并鉴定其抗菌活性.经金属螯合初步纯化的重组蛋白在cysteine/cystine氧化还原体系中氧化形成二硫键,用变性条件下的'凝胶过滤除去多聚体,稀释复性后用于肠激酶酶切反应,得到重组hepcidin.融合蛋白His-hepcidin经氧化、复性后的总收率为50%,纯度大于95%.酶切后所得重组hepcidin经抑菌圈试验检验,对枯草芽孢杆菌具有抗菌活性.LC-ESI-MS与园二色光谱检测显示重组hepcidin与天然hepcidin相对分子质量相同、二级结构相似.
作 者：朱亚平袁其朋 张怀 ZHU Ya-Ping YUAN Qi-Peng ZHANG Huai 作者单位：朱亚平,袁其朋,ZHU Ya-Ping,YUAN Qi-Peng(北京化工大学制药工程系,北京,100029)张怀,ZHANG Huai(北京科技大学生物科学与技术系,北京,100083)
刊 名：微生物学通报 ISTIC PKU英文刊名：MICROBIOLOGY 年，卷(期)： 33(4) 分类号：Q789 关键词：重组hepcidin 二硫键 复性 纯化篇5：硫酸软骨素肽的分离纯化和鉴定
硫酸软骨素肽的分离纯化和鉴定
本文直接用木瓜蛋白酶提取软骨硫酸软骨素肽,采用表面活性剂和三氯乙酸除蛋白质,乙醇沉淀多糖,透析,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析,从软骨中分离得到多糖肽,经红外光谱和琼脂糖电泳证明主要成分为硫酸软骨素肽,高效液相色谱和琼脂糖电泳证明该产品均一,纯度达到99.09%,相对分子量为75174Da,氨基酸平衡,呈味氨基酸较多.
作 者：熊双丽 金征宇 XIONG Shuang-li JIN Zheng-yu 作者单位：江南大学食品科学技术学院,江苏,无锡,214036 刊 名：食品科学 ISTIC PKU英文刊名：FOOD SCIENCE 年，卷(期)：2006 27(4) 分类号：Q514.3 关键词：硫酸软骨素肽 分离纯化 鉴定
