“蚂蚁呀嘿”通过精心收集，向本站投稿了7篇利用siRNA干扰MGMT基因表达的初步研究，今天小编就给大家整理后的利用siRNA干扰MGMT基因表达的初步研究，希望对大家的工作和学习有所帮助，欢迎阅读!
篇1：利用siRNA干扰MGMT基因表达的初步研究
利用siRNA干扰MGMT基因表达的初步研究
目的采用RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术,通过构建人O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase gene, MGMT)基因的特异性siRNA(small interfere RNA)真核表达载体,体外观察对人MGMT(hMGMT)基因的沉默作用.方法将合成的发卡样特异性hMGMT RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体并转染体外HelaS3细胞株,以半定量RT-PCR法检测hMGMT mRNA的表达水平,以MTT法检测转染后HelaS3细胞对BCNU的敏感性变化.结果成功构建MGMT siRNA的真核表达载体;所构建的载体能够特异性降低hMGMT mRNA的.表达水平,转染后HelaS3细胞对BCNU的敏感性增加.结论该RNA干扰真核表达载体可以特异性干扰hMGMT基因的表达.
作 者：王芳 周紫垣 刘胜学 曹佳 WANG Fang ZHOU Zi-yuan LIU Sheng-xue CAO Jia 作者单位：第三军医大学军事预防医学院军事毒理学教研室,重庆,400038 刊 名：第三军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)： 28(11) 分类号：Q503 Q782 Q786 关键词：O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因 RNA干扰 HelaS3篇2：RNA干扰技术用于survivin基因表达的研究
RNA干扰技术用于survivin基因表达的研究
目的:构建pSUPER-SVV表达载体,并在真核细胞中进行表达,验证survivin基因表达是否受到抑制.方法:设计特异性以survivin基因为靶序列的寡核苷酸序列,退火后将其连接于pSUPER.basic载体中,经测序鉴定插入序列的.正确性.以脂质体转染方法将pSUPER-SVV干扰质粒转染人类宫颈癌(HeLa)细胞,应用流式细胞术和RT-PCR方法检测survivin基因的表达情况.结果:成功构建survivin的RNAi表达载体.该载体可以使HeLa细胞中survivin基因在mRNA转录水平明显降低,与转染空质粒组相比差异具有显著性(P＜0.05).利用流式细胞术检测蛋白表达水平,转染pSUPER-SVV组抑制率可达31.62%,与转染空质粒组相比差异具有显著性(P＜0.001).结论:成功构建干扰survivin基因表达的载体,转染HeLa细胞后survivin基因在mRNA转录水平、蛋白表达水平均受到明显抑制.
作 者：沈波 鞠桂芝 刘扬 SHEN Bo JU Gui-zhi LIU Yang 作者单位：吉林大学公共卫生学院放射生物学教研室,吉林,长春,130021 刊 名：吉林大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION) 年，卷(期)：2006 32(3) 分类号：Q3 关键词：survivin RNA干扰 基因表达
篇3：靶向EGFR基因的siRNA表达载体构建及其生物学效应的研究
靶向EGFR基因的siRNA表达载体构建及其生物学效应的研究
目的构建靶向表皮生长因子受体(EGFR)基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体(pSi-EGFR),并观察其抑制人肺腺癌细胞株A549中EGFR基因表达的效果及生物学效应.方法利用Lipofectamine将构建的pSi-EGFR载体转入A549细胞中,应用实时定量荧光PCR、免疫荧光和流式细胞仪检测EGFR基因mRNA和蛋白水平的`表达,并采用四甲基偶氮唑蓝显色法(MTF)、集落形成实验观察细胞生长变化.结果pSi-EGFR可显著抑制A549细胞中EGFR基因的表达;转染pSi-EGFR细胞生长抑制率为67.8%,集落形成抑制率为59.4%.结论pSi-EGFR载体能够在A549细胞中引发RNA干扰(RNAi)效应下调EGFR基因表达来抑制细胞增殖.
作 者：白莉 祝蓉 陈智鸿 白春学 高磊 张新 BAI Li ZHU Rong CHEN Zhi-hong BAI Chun-xue GAO Lei ZHANG Xin 作者单位：复旦大学附属中山医院呼吸内科,上海,200032 刊 名：第三军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)： 27(23) 分类号：Q782 Q786 R73-362 关键词：表皮生长因子受体 RNA干扰 肺腺癌 细胞 生长篇4：水稻精细胞差异表达基因RSG6的克隆和初步研究
水稻精细胞差异表达基因RSG6的克隆和初步研究
用水稻 (Oryza sativa L.)精细胞优势表达克隆BF475207为探针,筛选水稻精细胞cDNA文库,得到一全长为1 176 bp的序列,其开放读码框编码281个氨基酸,与已知蛋白质无明显同源性,属于一新发现的.基因,GenBank登录号为AF442490.Southern杂交显示该基因可能含有内含子.RT-PCR结果显示该基因在根、叶、二细胞花粉、成熟花粉、授粉子房和精细胞中均有表达,但在精细胞中的表达量要高得多,是精细胞差异表达基因.将此基因命名为RSG6 (rice sperm gene 6).将RSG6的编码区克隆到表达载体pQE30上,构建重组质粒.在大肠杆菌M15中表达出N端融合了6×His的融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫家兔,制得高效价、高特异性的抗体.
作 者：白(或) 徐莺 唐琳 颜钫 苟小平陈放 BAI Yu XU Ying TANG Lin YAN Fang GOU Xiao-Ping CHEN Fang 作者单位：四川大学生命科学学院,成都,610064 刊 名：植物学报 ISTIC SCI英文刊名：ACTA BOTANICA SINICA 年，卷(期)： 45(3) 分类号：Q943.2 关键词：精细胞 克隆 表达 水稻 sperm cell cloning expression rice篇5：脉胞菌hH3v基因的初步研究及原核表达载体构建
脉胞菌hH3v基因的初步研究及原核表达载体构建
根据植物表达栽体pET52(b)多克隆住点和脉胞菌着丝粒结构相关蛋白CenH3的`编码基因hH3v序列,设计引物,通过PCR扩增将基因两端加上KpnⅠ和SacⅠ酶切住点,经双醇切后将hH3v插入表达载体pET52(b)中,利用热激法转化大肠杆菌Top10感受态细胞,在选择培养基上挑取单菌落培养,经PCR检测,表明目的基因原核表达载体构建成功,为着丝粒结构进一步的研究提供了基础.
作 者：王} 作者单位：牡丹江师范学院生物系,黑龙江,牡丹江,157012 刊 名：牡丹江师范学院学报（自然科学版） 英文刊名：JOURNAL OF MUDANJING NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES EDITION) 年，卷(期)： “”(4) 分类号：Q74 关键词：脉胞菌 hH3v 表达载体 PCR篇6：雨生红球藻中IPP异构酶基因表达调控机制的初步研究
雨生红球藻中IPP异构酶基因表达调控机制的初步研究
单细胞淡水绿藻 - 雨生红球藻能够在一定条件积累一种次生类胡萝卜素 - 虾青素,因而在生长后期藻体变为深红色.其中,IPP异构酶在雨生红球藻中的虾青素合成过程中发挥了重要作用.在本研究中,我们首次通过基因组上游步移克隆到了雨生红球藻中IPP异构酶基因的两个不同 5' 上游侧翼序列,大小分别是1.8 kb 和 2.5 kb.利用生物信息学方法分别对这两个不同 5′上游侧翼序列进行了序列分析,结果发现,二者具有某些相同的顺式作用元件,如可能的脱落酸反应元件(ABRE)、干燥或低温反应元件(DRE/C-repeat)、几种光反应元件(G-box, GAG-motif, I-box and ATC-motif)、热激反应元件(HSE)、机械伤害反应元件(WUN-motif)、水杨酸反应元件(TCA-element)、生长素反应元件(TGA-element)、茉莉酸甲酯反应元件(TGACG-element)、缺氧特异反应中的增强子类似元件(GC-motif)和反式作用因子MYB蛋白的结合位点(MBS and MRE),但是二者并不具有典型的`TATA框和CCAAT框.上述研究预示了雨生红球藻虾青素合成中IPP异构酶基因转录调控方式的多样化.
作 者：高政权 孟春晓 叶乃好 GAO Zheng-quan MENG Chun-xiao YE Nai-hao 作者单位：高政权,孟春晓,GAO Zheng-quan,MENG Chun-xiao(山东理工大学,生命科学学院,山东,淄博,255049)叶乃好,YE Nai-hao(中国水产科学院,黄海水产研究所,山东,青岛,266071)
刊 名：海洋通报(英文版) 英文刊名：MARINE SCIENCE BULLETIN 年，卷(期)：2009 11(1) 分类号：P7 关键词：虾青素 顺式作用元件 5′上游侧翼学列 雨生红球藻 IPP异构酶基因 astaxanthin cis-acting elements 5'-flanking region Haematococcus pluvialis IPP isomerase gene篇7：利用小干扰RNA表达框鉴定小鼠骨髓树突状细胞有效沉默RelB基因的实验研
利用小干扰RNA表达框鉴定小鼠骨髓树突状细胞有效沉默RelB基因的实验研究
目的构建靶向小鼠RelB基因的小干扰RNA(siRNA)表达框,鉴定针对小鼠骨髓树突状细胞(DC)的RelB基因最有效的siRNA序列.方法利用PCR方法构建3个不同位点的表达框,R1/siRNA、R2/siRNA和R3/siRNA分别位于1027、302和1121位点.利用阳离子脂质体AdvantGene转染小鼠骨髓DC,转染24h后,脂多糖(LPS)刺激DC,用RT-PCR和免疫荧光方法检测DC RelB基因表达的变化.结果经LPS刺激后DC成熟,RelB基因表达显著高于未成熟DC;R1/siRNA和R3/siRNA转染DC后,LPS刺激仍然可以增强RelB基因表达,而R2/siRNA转染DC后,LPS刺激不能增加RelB基因表达.结论R2/siRNA可有效抑制RelB基因表达,有望用于构建新的'耐受性DC应用于临床免疫耐受的诱导.
作 者：郑磊 包杰 王前 杨红玲 裘宇容 ZHENG Lei BAO Jie WANG Qian YANG Hong-ling QIU Yu-rong 作者单位：南方医科大学南方医院检验科,广东,广州,510515 刊 名：南方医科大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 26(3) 分类号：Q78 关键词：siRNA 树突状细胞 RelB 免疫耐受
