转铁蛋白受体单链抗体与BDNF融合蛋白的表达及活性鉴定

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篇1：转铁蛋白受体单链抗体与BDNF融合蛋白的表达及活性鉴定

转铁蛋白受体单链抗体与BDNF融合蛋白的表达及活性鉴定

脑源性神经营养因子(BDNF)对中枢神经系统的.多种神经元具有营养、修复和保护功能,但因无法通过血脑屏障限制了其应用.利用抗转铁蛋白受体(TfR)的单链抗体(ox26-scFv)作为脑转运载体,分别扩增单链抗体和BDNF基因,插入pTIG-Trx载体,构建融合基因表达载体pTIG-Trx/scFv-BDNF,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了高效表达.经Ni-NTA金属螯合层析柱纯化后,在41kDa处可见目的纯化条带.大鼠GH3细胞免疫酶染色显示,ScFv-BDNF融合蛋白能与转铁蛋白受体特异性结合,同时能够促进鸡胚背根节神经突起的生长,具备了BDNF的生物学活性.为使BDNF能够跨越血脑屏障成为中枢神经系统的治疗药物打下了实验基础.

作 者：颜冰 范明 黄培堂 YAN Bing FAN Ming HUANG Pei-tang  作者单位：颜冰,黄培堂,YAN Bing,HUANG Pei-tang(军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071)

范明,FAN Ming(军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850)

刊 名：中国生物工程杂志  ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 26(3) 分类号：Q81 关键词：转铁蛋白受体   单链抗体   脑源性神经营养因子   血脑屏障  

篇2：抗转铁蛋白受体单链抗体的表达、纯化及活性测定

抗转铁蛋白受体单链抗体的表达、纯化及活性测定

根据转铁蛋白受体和转铁蛋白特异性结合的.性质,利用亲和纯化的方法从胎盘中提取转铁蛋白受体.以转铁蛋白受体为抗原包被免疫管,从全合成人源噬菌体单链抗体库中筛选其抗体.对筛选到的抗体进行特异性鉴定后,将抗体基因插入表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后获得可溶性表达.HeLa细胞的免疫组化结果显示,表达的抗体可以与转铁蛋白受体结合.表达产物经Ni-NTA金属螯和层析柱纯化、脱咪唑后,从尾静脉注射小鼠.1h后,去除血液及毛细血管的干扰,在脑实质中检测到了抗体的存在,说明该抗体可以通过血脑屏障.

作 者：赵莉霞 颜冰 许龙 蒋世卫 张莹莹 杨志新 周晓巍 黄培堂 ZHAO Li-Xia YAN Bing XU Long JIANG Shi-Wei ZHANG Ying-Ying YANG Zhi-Xin ZHOU Xiao-Wei HUANG Pei-Tang  作者单位：军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 刊 名：生物工程学报  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 22(3) 分类号：Q78 关键词：转铁蛋白受体   单链抗体   表达   纯化   血脑屏障  

篇3：抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定

抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定

目的:从全人源噬菌体抗体库中筛选抗转铁蛋白受体(TfR)的抗体.方法:从HeLa细胞中提取总RNA,分两段反转录TfR胞外区cDNA,经两轮PCR后,获得胞外区基因.测序正确后,将其插入表达载体pPROEXTMHTa中,并在E.coli BL21(DE3)中表达.目的蛋白通过Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化、复性.用复性的TfR包被免疫管,从库容为1013 cfu/L的全合成人源噬菌体单链抗体库中,筛选抗TfR的抗体.结果:得到约1.9 kb的.TfR胞外区基因,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达;利用纯化、复性的TfR从抗体库中筛选到了8个可与人TfR特异性结合的单链抗体.结论:利用TfR在大肠杆菌表达的复性产物,可以筛选到与天然TfR特异性结合的单链抗体.

作 者：赵莉霞 颜冰 朱恒奇 许龙 黄培堂 ZHAO Li-xia YAN Bing ZHU Heng-qi XU Long HUANG Pei-tang  作者单位：军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 刊 名：细胞与分子免疫学杂志  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(5) 分类号：Q813.2 关键词：人转铁蛋白受体   噬菌体抗体库   筛选   单链抗体  

篇4：单链抗体及重组白介素-2双功能抗体融合蛋白的表达及其软件预测

单链抗体及重组白介素-2双功能抗体融合蛋白的表达及其软件预测

目的 利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的.二级结构及其理化性质,并探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因的表达.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗成骨肉瘤单链抗体(scFv)基因5′端,其3′与白介素-2(IL-2)基因连接构成分泌型单链双功能抗体scFv- IL-2基因,将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLxSN,重组质粒pL(scFv- IL-2)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人成骨肉瘤细胞命名为OSC/scFv-IL-2,以PCR,RT-PCR以及Western blotting 对scFv-IL-2基因修饰的OSC9901细胞进行鉴定.在构建融合蛋白之后,运用DNA分析软件DNAssist和蛋白质分析软件ANTHEPROT V5分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质.结果 经酶切、PCR及Western blotting分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(scFv- IL-2)SN,并获得高滴度产毒细胞株C26,scFv-IL-2融合蛋白通过DNAssist和ANTHEPROT V5软件分析获得了融合蛋白的二级结构及其理化性质.结论 利用生物信息学网络资源进行分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据.

作 者：史梦远 王海涛 张芳琳 SHI Meng-yu WANG Hai-tao ZHANG Fang-li  作者单位：第四军医大学基础部微生物教研室,陕西,西安,710032 刊 名：新乡医学院学报  ISTIC英文刊名：JOURNAL OF XINXIANG MEDICAL COLLEGE 年，卷(期)： 25(2) 分类号：Q782 关键词：单链抗体   生物信息学资源   融合蛋白  

篇5：抗CEA单链抗体与链亲和素融合基因的表达

抗CEA单链抗体与链亲和素融合基因的表达

克隆分泌CEA杂交瘤细胞重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),以Linker连接VH及VL构建抗CEA单链抗体.同时以Spacer连接单链抗体和链亲和素,构建成功单链抗体和链亲和素融合基因,克隆该融合基因至原核表达载体,pET21a(+),经IPTG诱导表达出该双特异性融合蛋白.活性鉴定表明该融合蛋白具有结合CEA及生物素的双特异性.该融合蛋白在生物领域中有较广阔的应用前景.

作 者：任军 季万胜 周绍娟 陈峥 张学庸 樊代明 REN Jun JI Wan-Sheng ZHOU Shao-Juan CHEN Zheng ZHANG Xue-Yong FAN Dai-Ming  作者单位：任军,REN Jun(第四军医大学西京医院肿瘤中心,西安,710032)

季万胜,周绍娟,陈峥,张学庸,樊代明,JI Wan-Sheng,ZHOU Shao-Juan,CHEN Zheng,ZHANG Xue-Yong,FAN Dai-Ming(第四军医大学西京医院消化内科,西安,710032)

刊 名：生物化学与生物物理进展  ISTIC SCI PKU英文刊名：PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS 年，卷(期)：2000 27(4) 分类号：Q786 关键词：单链抗体   融合蛋白   基因表达